(1) 计算每次注射所需抗原的量和体积。皮下注射或肌肉注射时，每只小鼠每次 5-I00ug 抗原 ，注射体积小于 20uL; 
腹腔内注射时，每只小鼠每次注射体积为 200〜500ul。
强洗涤剂会减弱乳化效应, 需避免。
准备大约比最终所需量多50%的疫苗 。

(2) 根据所加材料的总体积选择针筒。佐剂和抗原的总体积应大约为针筒体积的一半 。
例如 ，准备 2.5ml 的疫苗时，用 5ml 的针筒进行乳化。

(3) 使用前 37℃预热弗氏完全佐剂（或弗氏不完全佐剂），振荡1-2 min或用手倒转瓶子数次，将结核分枝杆菌均匀重悬。
吸取所需体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂到针筒内，连接针筒到双孔接头，排出空气 (过量空气将妨碍稳定的乳化剂的形成）。

(4) 吸取水溶性抗原到另一针筒，排出空气（过量空气可妨碍稳定的乳化剂的形成）。

(5) 将有抗原的针筒连在双孔接头的一端。
确定两个针筒均经 Luer-lock 安全地固定在双孔乳化接头上。

(6) 平稳地推动活塞，使所有的抗原溶液穿过双孔接头与弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂混合。
相互交替，持续使混合物从一个针筒转到另一个 。

(7) 按上述步骤继续乳化，直到稳定的乳化剂形成。
这将需要数分钟。推出一小滴乳化剂到盛有水的烧杯内，小乳滴应该在水面形成稳定的油珠。
如果乳剂滴人水面分散，重新组装针筒，继续乳化。

(8) 将所有乳化剂推人一个针筒。拔去双孔接头，加上注射针头。
另外可选择将空针筒拔去，换上1ml 无菌针筒。
此时，乳化剂可转入1ml 针筒以备注射。

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