细胞常规培养是在细胞房中进行,在超净工作台或生物安全柜中,把细胞处理好,根据需要加入细胞培养基,放入细胞培养瓶/皿或细胞培养板中,再放到带有5% CO2 的37℃恒温培养箱中培养。细胞就像花花草草,尤其是细胞株基本每天都要观察、打理的哦!
培养的细胞从哪里来?
1.细胞株
简单说就是买的或送的。
2.原代细胞
组织或血液中提取的。一般细胞株可以连续传代,而原代细胞养着养着就挂了。
培养细胞的生长方式有哪些?
1.贴壁生长
必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种肿瘤细胞等。(你把培养皿或培养瓶底朝上,细胞也不会掉下来。
2.悬浮生长
于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞等。
细胞完全培养基的组成有哪些?
基础培养基:80-95%
血清:5-20%
碳酸氢钠:2.0g/L
青、链霉素:各200单位/毫升
细胞传代
何为细胞传代?
细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿即为细胞传代。
为什么要传代?
简单说就是“孩子”长大了,要“分家”!
细胞株在培养过程中数量会不断增多,但是培养细胞的细胞瓶/皿的空间有限,就会导致细胞之间接触过于紧密,会使得细胞增殖收到抑制,所以我们必须把其中一部分细胞转移到别的细胞瓶/皿,让细胞有足够的生长空间。
什么时候传代?
观察培养基是否正常,细胞状态如何,细胞密度如何,决定是否传代。如培养基变黄,细胞长成致密单层等情况。
传代方法有哪些?
1.悬浮生长细胞传代
1)离心法传代:离心1000转/分去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。
2)直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁上,将上清培养液去除1/2~2/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2.半悬浮生长细胞传代
此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但是贴壁不牢,可用直接吹打使细胞从瓶壁上脱落下来,进行传代。
3.贴壁生长细胞传代
采用胰酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
*以上内容来自网络
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