细胞划痕实验的所需材料、实验步骤
来源于:上海联硕生物科技有限公司,浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2024/7/15 17:16:00
所需材料
1、仪器:细胞计数仪、台式离心机、CO2培养箱、倒置显微镜、移液枪、移液管移液器、4℃和-20℃冰箱、6孔培养板、直尺、maker笔。
2、试剂:细胞适配培养基、FBS、PBS、胰酶、样本溶剂。
实验步骤
1、划线:先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔,每孔至少穿过5条线;
2、铺板:处于对数生长期的细胞,胰蛋白酶消化成单细胞悬液,接种于6孔培养板;细胞铺板6w/孔,接种原则为过夜后融合率达到100%,每孔最终的培养基总量2mL;
3、细胞培养37℃、5%CO2培养箱中培养24h;
4、划痕:第二天用200微升枪头比着6孔板盖子或直尺,平行或垂直于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜;
5、清洗:PBS冲洗细胞3次,除去划下的细胞,加入无血清培养基;
6、拍照:擦去6孔板背后的marker横线划痕。4倍镜下进行拍照,保证划痕居中且垂直,注意背景一致,加入待测样本,设置浓度梯度,可按0,6,12,24h时间点取样,拍照。
7、结果分析,使用Image J软件打开图片后,随机划取6至8条水平线,计算细胞间距离的均值或者划痕面积均值。
8、数据处理:
细胞迁移率(伤口愈合率)=(初始划痕面积-t时刻划痕面积)/初始划痕面积
细胞迁移率(伤口愈合率)=(初始细胞间距离均值-t时刻细胞间距离均值)/初始细胞间距离均值
*以上内容来自网络
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